Técnicas de Procesamiento Histológico y Gestión de Residuos Biosanitarios

Gestión de Residuos, Seguridad y Conservación

Conceptos Fundamentales

Eficiencia: Relación entre recursos utilizados en un proyecto y logros conseguidos con el mismo.
Riesgos de seguridad: Derivados del puesto de trabajo.
Riesgos biológicos: Derivados de la exposición a agentes biológicos.
Riesgos químicos.
Riesgos ergonómicos.
EPI (Equipos de Protección Individual).

Clasificación de Residuos

I. Residuos generales: Papel, cartón, comida, mobiliario, vidrio.
II. Residuos biosanitarios asimilables a urbanos: Aquellos no incluidos en el grupo III.
III. Residuos biosanitarios especiales (9 grupos):
1. Residuos de pacientes con infecciones altamente virulentas, erradicadas o importadas o de muy baja incidencia en España (Rabia, fiebres víricas, carbunco).
2. Residuos contaminados con heces de pacientes afectados de cólera o disentería amebiana.
3. Residuos contaminados con secreciones respiratorias de pacientes con tuberculosis o fiebre Q.
4. Filtros de diálisis de pacientes portadores de Hepatitis B, C o VIH.
5. Residuos cortantes o punzantes.
6. Cultivos y reservas de agentes infecciosos (Placas de Petri, hemocultivos, etc.).
7. Residuos de animales infecciosos.
8. Recipientes que contengan más de 100 ml de muestras de sangre o productos derivados.
9. Cualquier resto anatómico humano reconocible como tal.
IV. Cadáveres y restos humanos de entidad suficiente.
V. Residuos químicos.
VI. Residuos citotóxicos.
VII. Residuos contaminados por sustancias radiactivas.

Envasado y Almacenamiento

Los envases deben ser de un solo uso, mantenerse intactos hasta su eliminación y no someterse a presiones mecánicas. Los envases rotos o con fugas serán reenvasados.

Residuos Clase II

Opacos, impermeables, resistentes a la humedad.
Combustión sin emisión tóxica.
Volumen no superior a 70 litros.
Color verde.
Galga mínima 200.

Residuos Clase III

Envases Rígidos o Semirrígidos

Libres de sustentación, opacos, impermeables, resistentes a la humedad y a la perforación.
Provistos de cierre hermético.
Combustión sin emisión tóxica.
Volumen superior a 60 litros.
Al menos la tapa debe ser roja y estar señalizados con el pictograma “Biopeligroso”.

Envases no rígidos

Opacos, impermeables y resistentes a la humedad.
Combustión sin emisión tóxica.
Volumen superior a 80 litros.
Al menos la tapa debe ser roja y estar señalizados con el pictograma “Biopeligroso”.
Galga mínima 30.

Conservación y Registro de Muestras

Conservación:

En el estudio histológico se utiliza una pequeña porción del material remitido; el resto debe guardarse para estudios complementarios.
No se puede conservar en el mismo líquido utilizado para la fijación porque produciría endurecimiento.
La solución conservante más indicada es el alcohol etílico al 70%. En él, además de iniciarse la deshidratación, el tejido fijado puede conservarse durante meses sin apenas cambios.
Otras opciones: formalina neutra o tamponada al 10%; deshidratación en alcoholes crecientes y conservación en butanol (conservación indefinida, mejora textura tisular); o soluciones de Jores (órganos completos procedentes de necropsias).

Registro:

Siempre al recibir la muestra (manual o automatizado).
Las muestras deben ir acompañadas de un volante de petición debidamente cumplimentado con: datos del paciente, datos del servicio y médico, origen anatómico de la biopsia, resumen de la historia clínica y posible diagnóstico.

Inclusión y Procesamiento de Tejidos

Inclusión: Proceso que consiste en la eliminación completa del agua presente en los tejidos, sustituyéndola por un material sólido que mantenga la estructura, impidiendo la fragmentación durante el corte.

Materiales Empleados

Microscopía óptica (M.O.): Parafina, celoidina o gelatina.
Microscopía electrónica (M.E.): Resinas epóxicas o plásticas.

Pasos del Procesamiento

Deshidratación → Aclaramiento o desalcoholización → Infiltración

1. Microscopía Óptica

Deshidratación

Eliminación completa de agua para que se pueda embeber el tejido en medios de inclusión no hidrosolubles. Se realiza mediante alcohol etílico en gradaciones crecientes (50%, 70%, 80%, 96% y 100%).

El volumen del baño será 10 veces superior al de la muestra.
Realizar mayor número de baños implica: menos permanencia en cada baño, menor índice de saturación de agua en el alcohol, mejor control de la deshidratación y menor riesgo de alteración tisular.
La exposición prolongada provoca endurecimiento de los tejidos.

Aclaramiento o Desalcoholización

Sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusión. Su finalidad es que la pieza se halle embebida en un agente líquido en el que pueda disolverse el medio de inclusión.

Infiltración o Impregnación

Proceso que tiene como objeto «rellenar o infiltrar» completamente la muestra con el medio que se va a utilizar para la imbibición del tejido.

Orientación de la Muestra y Confección de Bloques

Los bloques deben tener dureza homogénea, plasticidad y elasticidad. Se utilizan estaciones de inclusión o “parafineros” que constan de:

Dispensador de parafina líquida.
Placa caliente (para orientar la pieza).
Placa fría (10-15 ºC) para solidificar.
Material necesario: pinzas de inclusión, mechero de alcohol y moldes metálicos.

Otras Técnicas de Procesamiento

Inclusión en gelatina: Para cortes macrométricos de órganos completos. No requiere deshidratar ni aclarar.
Inclusión en celoidina: Para trabajos neurohistológicos o muestras muy duras/frágiles. Procesado lento (semanas).
Inclusión en medios hidrosolubles: Como el polietilenglicol, para demostrar elementos que se desnaturalizan por calor o solventes (enzimas o lípidos).
Inclusión en plástico: Para tejido óseo sin descalcificar, conservando la estructura excepcionalmente.

Microtomía y Tipos de Micrótomos

Tipos de Micrótomos

Micrótomo de oscilación (balanceo): Muy empleado en anatomía patológica. Sistema de palanca, bajo coste, pero no permite secciones seriadas.
Micrótomo de deslizamiento: Tipo Leitz. Muy estable, sin vibración. Permite bloques grandes pero es lento y peligroso por la exposición de la cuchilla.
Micrótomo de congelación: Para tejido no deshidratado.
Ultramicrótomo: Para microscopía electrónica de transmisión (cortes de 10 a 500 nm).
Micrótomo de Rotación o Minot: El más común. Transforma movimiento de rotación en ascenso/descenso. Permite secciones seriadas muy finas (1 a 60 µm).
Micrótomo de Láser: Cortes muy finos (10-100 µm) sin daño térmico.
Criostato: Micrótomo dentro de una cámara frigorífica (-15 a -20 ºC). Utilizado en biopsias intraoperatorias.

Tipos de Cuchillas

Bicóncava: Para parafina blanda en micrótomos de balanceo o rotación.
Plano-cóncava (Tipo A y B): Tipo A para deslizamiento (parafina) y Tipo B para celoidina.
Biplana en cuña (Tipo C): Para criostato o parafina en micrótomo de Minot.
Biplana (Tipo D): Para material congelado o tejidos muy duros.

Coloración y Tinciones Histológicas

Clasificación de Colorantes según su Grupo Cromóforo

C. nitrados o nitrosados: Ácido pícrico.
C. azoicos: Monoazoicos (Orange G) y diazoicos (Rojo Sudán).
C. derivados de la antraquinona: Rojo de alizarina S.
C. derivados de la acridina: Naranja de acridina.
C. derivados de las iminas quinónicas: Oxacínicos, tiacínicos y acínicos.
C. derivados del trifenilmetano: Fucsinas, verde ligero.
C. derivados del xanteno: Pironina, rodamina.
C. derivados de las ftalocianinas: Azul o amarillo alcián.

Clases de Coloraciones

Topográficas: Visión de conjunto (Hematoxilina-Eosina).
Citológicas: Estructura celular íntima (Papanicolaou).
Histoquímicas: Relacionadas con la química y función tisular.
Estructurales: Evidencian fibras elásticas, etc.
Ultraestructurales: Para microscopía electrónica.
Tricrómicas: Utilizan 3 colorantes (Tricrómico de Masson).
Negativa: Tiñe el contorno, dejando la estructura en estudio sin color.
De viabilidad: Evalúa células vivas (Azul tripán tiñe células muertas).

Coloraciones para Lípidos

Lípidos homofásicos: Técnicas Sudán y Oil Red O.
Lípidos heterofásicos: Técnica PAS.
Sudán III y IV: Rojo intenso a naranja.
Sudán Negro: Lípidos y mielina en negro.
Azul de Nilo: Grasas neutras (rosa/rojo) y ácidos grasos (azul oscuro).

Actividades y Autoevaluación

Preguntas de Selección Múltiple

Los micrótomos de rotación permiten preparar muestras entre: d) 1 a 60 micras.
Las cuchillas bicóncavas por ambas partes se utilizan en el micrótomo de: d) Balanceo.
¿Cuál es el micrótomo de uso rutinario en un laboratorio de anatomía? d) Tipo Minot.
¿Cuál es el grosor correcto de los cortes de rutina? c) 3-5 micras.
¿Cuál es la temperatura idónea del baño de flotación? a) 40-50 °C.
Se usa para aumentar la adherencia al portaobjetos: c) Polilisina.
El secado del portaobjetos suele ser a: a) 60 °C durante 30 minutos.
El OCT: b) Aumenta la adherencia.
¿Cuál es el grado de inclinación de la cuchilla del micrótomo más habitual? b) 10-15°.
¿Cuál de las siguientes opciones no constituye una medida de protección en un micrótomo? b) Cuchillas de filo único.

Resolución de Problemas en el Corte (Tabla)

Problema: Agujeros en mitad del tejido. Causa: Inclusión defectuosa. Solución: Invertir el proceso y repetir inclusión.
Problema: Cortes con estrías verticales. Causa: Cuchilla sin filo. Solución: Mover a zona limpia o cambiar cuchilla.
Problema: Alternancia de corte fino y grueso. Causa: Material muy duro. Solución: Ralentizar velocidad de corte.
Problema: Cortes muy arrugados. Causa: Bloque caliente. Solución: Enfriar el bloque.

Evaluación Tema 4

Los colorantes de tipo físico están ligados a propiedades de: d) Ninguna de las anteriores.
Para identificar astrocitos y células de glía se utiliza: d) Ninguna es correcta.
Para el contrastado de microscopía electrónica es clave: c) Tetróxido de osmio.
Para ver fibras elásticas se utiliza: b) Orceína.
El luxol fast blue sirve para: d) Ninguna es correcta.
No es un colorante natural: d) Derivados de anilina.
Van Gieson tiñe las fibras colágenas de color: c) Rojo.
Las sustancias acidófilas se tiñen con: b) Eosina.
La fijación habitual para H-E es: a) Formol tamponado.
La causa más común de mala tinción de H-E es: a) Mala fijación del tejido.
Los radicales responsables de la aparición de color se denominan: a) Cromóforos.
Tinción que da una visión de conjunto: d) Tinción topográfica.

Verdadero o Falso

Todos los tejidos animales son incoloros salvo que se tiñen. FALSO
La mayoría de los colorantes artificiales derivan de la acridina. (Sin respuesta en original)
Los grupos cromógenos poseen carácter ácido o básico y son responsables de la afinidad. FALSO
Los colorantes básicos tiñen estructuras ácidas contenidas en los núcleos. VERDADERO
Cuando un colorante tiñe de una coloración diferente a la suya se denomina metacromasia. VERDADERO
En la impregnación, las estructuras más densas son las que menos se tiñen. FALSO
La temperatura ambiente afecta al tiempo de coloración. VERDADERO
Las muestras teñidas no nos dan información para mejorar la técnica. FALSO
Los colorantes nucleares tiñen de forma específica la cromatina. VERDADERO
Los colorantes citoplasmáticos son más específicos que los nucleares. FALSO
En la tinción de viabilidad con azul tripán, las células no viables aparecen teñidas de azul. VERDADERO
En las coloraciones progresivas, se aplica un proceso de diferenciación. FALSO

OTROS TEMAS: (Pendiente de desarrollo)