1. Respuestas en el Cultivo de Tejidos Vegetales (CTV) y el Papel del Explante
- Obtención del tejido calloso: Es la formación de una masa de células indiferenciadas (callo). Este tejido se origina como respuesta a una herida y puede mantenerse y multiplicarse in vitro. Es fundamental como paso intermedio para la regeneración de plantas o la producción de metabolitos.
- Organogénesis: Consiste en la formación de órganos como raíces o brotes, ya sea directamente del explante o a partir del callo. Este proceso depende del equilibrio entre auxinas y citocininas.
- Embriogénesis somática: Es la formación de embriones a partir de células somáticas, los cuales pueden desarrollarse en plantas completas. Es una vía eficiente para la propagación masiva.
- Desarrollo de planta completa: A partir de una pequeña parte (explante), se puede regenerar una planta entera mediante yemas, organogénesis y embriogénesis.
- Necrosis: Muerte del tejido si las condiciones ambientales no son adecuadas.
El papel del explante
El explante es la parte de la planta utilizada para iniciar el cultivo (por ejemplo, hoja, tallo o raíz). Su elección es crítica para el éxito del proceso; los explantes más jóvenes y pequeños suelen responder mejor, crecer más rápido y presentar menores problemas de contaminación.
2. Papel de los Reguladores de Crecimiento Vegetal (RCV)
Los RCV controlan el desarrollo y la diferenciación del tejido cultivado, dirigiendo el tipo de respuesta del explante:
- Auxinas: Promueven la formación de raíces, callo y embriogénesis.
- Citocininas: Inducen la formación de brotes y la proliferación de yemas.
El balance auxina/citocinina determina la respuesta morfogénica:
- Alta concentración de auxinas: Favorece la formación de raíces y callo.
- Alta concentración de citocininas: Favorece la formación de brotes.
- Balance intermedio: Favorece la organogénesis o embriogénesis.
3. Procedimiento para el Cultivo de Células en Suspensión
- Selección del explante: Se elige un tejido vegetal (hoja, tallo o raíz) preferentemente joven, sano y libre de enfermedades.
- Desinfección: Se elimina la contaminación superficial para obtener un cultivo axénico.
- Inducción del callo: El explante se coloca en un medio sólido (como el medio MS) suplementado con reguladores de crecimiento.
- Establecimiento de la suspensión: Una vez obtenido el callo, se transfiere a un medio líquido bajo agitación constante para separar las células y mantenerlas en suspensión.
- Condiciones controladas: Se mantienen a temperaturas cercanas a los 25 °C, con un pH adecuado, fotoperiodo controlado (a veces oscuridad inicial) y renovación periódica del medio para asegurar la oxigenación.
4. Ventajas de la Propagación mediante Esquejes vs. Semilla
Ventajas de los esquejes:
- Obtención de plantas genéticamente idénticas a la planta madre (clones).
- Método más rápido que la propagación por semilla.
- Permite propagar especies que no producen semillas o presentan baja germinación.
- Mayor uniformidad en el cultivo.
Desventajas de la propagación por semilla:
- Genera variabilidad genética.
- Es un proceso más lento.
- No garantiza la conservación de las características de la planta madre.
5. Protocolo de Micropropagación
Para llevar a cabo la micropropagación, se siguen estas etapas:
- Selección y desinfección: Se utilizan brotes axilares o meristemos. Se desinfectan con etanol e hipoclorito de sodio, enjuagando con agua estéril.
- Establecimiento y multiplicación: El explante se coloca en medio MS con nutrientes, vitaminas, sacarosa y un agente gelificante (agar). Se añaden citocininas (como BAP) para estimular la formación de brotes.
- Enraizamiento: Los brotes se transfieren a un medio con auxinas (como AIA o IBA) para promover el desarrollo radicular.
- Adaptación (Aclimatación): Las plantas se transfieren a un sustrato, controlando gradualmente la humedad, la luz y el riego para su transición al ambiente exterior.