Desarrollo Larval Temprano de Litopenaeus vannamei: Estadios Nauplio
Durante esta etapa, las larvas mudan cinco veces, aproximadamente cada siete horas. Cada una de estas mudas representa un estadio diferente. Existen laboratorios que reportan seis estadios naupliares; sin embargo, la mayor parte de ellos manejan cinco estadios para la especie Litopenaeus vannamei. Por ello, en el presente manual se describen cinco estadios (N-1, N-2, N-3, N-4 y N-5). La morfología del sexto estadio naupliar se puede consultar en el trabajo de Kitani (1986).
Los nauplios presentan un nado intermitente, es decir, nadan rápido una corta distancia y se detienen para luego volver a nadar. También son atraídos por la luz, lo que se conoce como fototropismo positivo. Este comportamiento es utilizado para seleccionar los nauplios más sanos, ya que una rápida atracción a la luz se considera que los organismos presentan un buen estado de salud. Cuando están en reposo, los nauplios se suspenden en una posición horizontal con la parte dorsal del cuerpo hacia abajo y los apéndices inclinados hacia arriba.
Los nauplios tienen un cuerpo piriforme, más grande en el extremo anterior, con tres pares de apéndices cefálicos: un par de anténulas, un par de antenas y un par de mandíbulas. Durante esta etapa no hay alimentación exógena, ya que aún no se abren la boca ni el ano. Los nutrientes necesarios para su desarrollo provienen completamente de sus reservas contenidas en el saco vitelino.
Nauplio 1
Los nauplios recién eclosionados presentan un aspecto rugoso con los apéndices frontales contraídos. Durante los primeros 30 minutos no nadan ni mueven sus apéndices, pero transcurrido este tiempo, pueden nadar de forma intermitente: nadan brevemente y luego se detienen. Este estadio dura aproximadamente 5 horas. Presentan una longitud corporal de entre 0.31 y 0.40 mm y un ancho corporal de 0.19 mm.
El cuerpo es piriforme, cuya mitad anterior, con tres pares de apéndices, es algo más grande que la parte posterior. El par de apéndices anteriores (primeras antenas o anténulas) son unirrámeas, mientras que el segundo y tercer par de apéndices (segundas antenas o antenas y mandíbulas) son birrámeas. Los apéndices presentan setas sin plumas. Las anténulas son estructuras que se proyectan desde la parte anterior del cuerpo, siendo las de los extremos las más desarrolladas.
Las antenas se originan inmediatamente después de las anténulas y cada una está constituida por un endopodito que presenta cinco setas simples y un exopodito provisto también con cinco setas simples. El exopodito de la antena presenta cinco setas: tres laterales largas y dos terminales largas. A este exopodito se le adiciona una seta en cada muda, lo que puede ser utilizado como referencia para la diferenciación entre los estadios naupliares.
Las mandíbulas son más cortas que los apéndices anteriores y se originan en la región ventromedial del cuerpo. Tanto el exopodito como el endopodito de cada mandíbula presentan tres setas. También presentan en la zona anterior cefálica un ojo naupliar (ocelo), un labrum en la superficie ventral, una protuberancia o escudo dorsal, una pequeña espina dorsomedial y un par de espinas caudales. Las puntas de sus dos espinas caudales están ligeramente dobladas medialmente.
Nauplio 2
La longitud corporal es de 0.32 a 0.45 mm y la parte más ancha del cuerpo sigue midiendo aproximadamente 0.20 mm. La duración promedio de esta etapa es de cinco horas. La forma del cuerpo es muy similar al estadio anterior; sin embargo, en este se puede distinguir la presencia de plumas en las setas más largas de cada apéndice. La espina dorsomedial desaparece. Las setas caudales con sétulas se flexionan en dirección lateral.
La anténula presenta una seta terminal larga y una moderada. El exopodito de la segunda antena (o antena) presenta seis setas: tres laterales, dos terminales y una terminal corta. El endopodito presenta dos setas largas terminales. Otra característica que diferencia este estadio con el anterior es la presencia de pequeñas sétulas en los bordes de las setas largas.
Nauplio 3
Este estadio tiene una duración promedio de 10 horas. La longitud corporal es de 0.33 a 0.50 mm y el ancho corporal de 0.20 mm. La parte posterior del cuerpo es más delgada y alargada que los estadios anteriores. La parte posterior es bifurcada. Aparecen los rudimentos de los apéndices ventrales.
La anténula presenta dos setas largas y una corta, y las bases de la antena muestran trazas de segmentación; sin embargo, aún es difícil distinguirlas. Los exopoditos de la antena ahora presentan siete setas: tres laterales largas, tres terminales largas y una terminal corta. Los endopoditos de las anténulas aumentan su longitud y ahora tienen ocho setas terminales largas. Las mandíbulas no muestran cambios significativos.
En la región ventral de la parte posterior del cuerpo aparecen pequeños abultamientos o primordios de las maxilas y maxilípedos. En la parte posterior del cuerpo se puede observar la hendidura caudal de donde se originarán un par de lóbulos caudales, cada uno con tres setas: una larga y dos cortas.
Nauplio 4
La duración de este estadio es, en promedio, de 10 horas. La longitud corporal es aproximadamente de 0.35 a 0.55 mm y el ancho corporal de 0.20 mm. La porción posterior se ha vuelto más delgada o deprimida y la parte posterior bifurcada. En las anténulas presentan seis segmentos, pero son poco visibles y el número de setas permanece igual que en el estadio anterior.
En la segunda antena se puede observar un protopodito bisegmentado, y de este se originan un endopodito y un exopodito. El exopodito presenta ocho setas: cuatro laterales largas, dos terminales largas, una terminal media y una terminal corta. Los apéndices empiezan a segmentarse, aunque esto no siempre sucede. Los primordios de las maxilas y maxilípedos también aparecen.
Las mandíbulas presentan un cambio importante, ya que se han desarrollado las estructuras masticatorias a partir del primordio basal. Se acentúan más los lóbulos caudales y presentan un total de cinco espinas en cada lado.
Nauplio 5
Es el último estadio de las larvas nauplio y dura alrededor de 20 horas. Se presentan cambios estructurales bien definidos. La longitud corporal varía de 0.58 a 0.61 mm y la parte más ancha del cuerpo sigue midiendo aproximadamente 0.20 mm. La segmentación en las anténulas es evidente y presentan ocho setas cada una. En la parte anterior de la cabeza aparecen dos pequeños abultamientos que forman los primordios oculares, cubiertos aún por el caparazón transparente.
La antena tiene un endopodito no segmentado, provisto con un total de ocho setas plumosas; el exopodito presenta diez segmentos definidos, observándose un total de ocho setas plumosas.
En la mandíbula, las placas masticadoras están completamente desarrolladas y los discos trituradores están armados con una serie de dentículos cortantes. Tanto el endopodito como el exopodito mandibular permanecen sin mayores cambios, conservando el número original de setas plumosas. Las estructuras de las maxilas y los maxilípedos presentan segmentaciones visibles, pero permanecen inactivas. Los lóbulos caudales presentan siete setas. En el contorno del caparazón se pueden observar apéndices ventrales no funcionales con una seta apical.
Etapa de Protozoeas
Después de la metamorfosis del Nauplio 5, aparece la segunda etapa larval: la de protozoea, con tres estadios (Z-1, Z-2 y Z-3). En esta etapa se denota un cambio en la forma de la larva. El cuerpo es más alargado y adaptado para el nado continuo hacia adelante, el cual se lleva a cabo con el movimiento de las antenas, y ahora es más lento y menos irregular que en el estadio anterior. En esta etapa se observan el par de maxilípedos bien desarrollados, que también participan en la natación.
La presencia de apéndices alimenticios sustenta que la larva ahora es capaz de ingerir alimento; de hecho, una característica de esta etapa es su alimentación continua. Mientras se alimentan, se pueden observar las contracciones del tracto digestivo y la presencia de «hebras» de material fecal. Un tracto digestivo lleno y una respuesta positiva a la luz son criterios utilizados para evaluar el estado de salud de los organismos.
Protozoea 1
La longitud corporal es de aproximadamente 0.80 a 1.00 mm y el ancho corporal de aproximadamente 0.50 mm. Este estadio dura aproximadamente 48 horas. El cuerpo está dividido en dos partes: cabeza y el resto del cuerpo, formado por el tórax y el abdomen (región pereioploónica). El tórax está segmentado en seis, mientras que el abdomen no. La cabeza está cubierta por un caparazón hexagonal y aún presenta el ojo naupliar y el par de apéndices frontales.
La anténula está compuesta por tres segmentos. La región basal se subdivide en cinco articulaciones y presenta una seta en el margen interno distal. El segmento medio, con siete filas de espínulas sobre la superficie, posee una seta en la porción media, una en el margen distal interno y otra en el margen distal externo. El segmento distal presenta cuatro setas terminales y dos setas externas subterminales.
La segunda antena está compuesta por un protopodito bisegmentado, un endopodito bisegmentado y un exopodito con diez segmentos. El protopodito presenta una seta en el margen distal. El endopodito presenta tres setas sobre el segmento basal y cinco setas terminales sobre el segmento distal. El exopodito presenta siete setas internas terminales, cuatro terminales y dos setas externas laterales.
En el par de mandíbulas, desaparecen los exopoditos y los endopoditos. Se forma una estructura masticadora dividida en un proceso incisivo, con dos dientes aserrados, y un proceso molar, con pequeños dientes trituradores. La maxílula (primera maxila), ya activa, está compuesta por un protopodito libre de segmentos, un endopodito con tres segmentos provisto de nueve setas simples con una fórmula setal de 2 + 2 + 5 y un pequeño exopodito con cuatro setas.
La segunda maxila consiste en un protopodito sin segmentos, un endopodito con una fórmula setal 2 + 2 + 2 + 3 y un exopodito con cinco setas. Los maxilípedos primero y segundo son casi idénticos, solo que el segundo es más pequeño que el primero. Ambos presentan un protopodito bisegmentado, un exopodito con cuatro segmentos y un endopodito no segmentado. El endopodito del primer maxilípedo presenta una fórmula setal 3 + 1 + 2 + 5, mientras que para el endopodito del segundo maxilípedo es 2 + 1 + 2 + 5. En cuanto a los exopoditos, el primer exopodito presenta siete setas y el del segundo maxilípedo presenta seis setas. El número de setas en la furca caudal no cambia con respecto al estadio anterior, pero sí se aprecian más desarrolladas y elongadas. El tracto digestivo va desde la boca hasta el ano, en el extremo posterior del cuerpo, en la región anterior de la escotadura caudal.
Protozoea 2
La longitud corporal está entre 1.13 y 2.00 mm, con aproximadamente 0.80 mm de ancho. Este estadio dura alrededor de 48 horas y las larvas se distinguen por presentar dos ojos compuestos pedunculados. También presenta un rostrum ventral, un par de espinas supraorbitales y el abdomen segmentado.
Los apéndices presentan pocos cambios, como la adición de setas en la anténula, la cual ahora presenta siete setas en el segmento distal, y tres, o en ocasiones solo dos setas cortas, en el margen distal del segmento medio. En la antena se presenta un protopodito bisegmentado, mientras que en el endopodito desaparecen los segmentos. El exopodito no presenta cambios aparentes de importancia. En la región torácica se pueden apreciar siete segmentos y en la región abdominal, cinco. Las setas furcales siguen siendo siete, pero ahora la escotadura furcal es más pronunciada o evidente.
Protozoea 3
El último estadio de protozoea dura aproximadamente 48 horas. La longitud corporal promedio varía de 1.88 a 2.70 mm. Las larvas se caracterizan por la aparición de los urópodos y la presencia de espinas dorsales sobre los segmentos abdominales. El rostrum se hace más evidente y aún se observan las espinas supraorbitales.
Las anténulas presentan solo tres segmentos. El segmento basal presenta una seta en el margen interno distal. El segmento medio presenta dos setas en el margen distal interno, una en el margen distal externo y de cuatro a cinco pequeñas setas en el margen distal. Se pueden observar articulaciones rudimentarias en la fase tardía, en la parte media de este segmento. El segmento distal presenta cinco setas terminales y dos externas subterminales.
Las antenas, mandíbulas, maxilas y maxilípedos permanecen casi iguales que en el estadio anterior, exceptuando la adición de dos setas en el primer maxilípedo y una adicional en el segundo maxilípedo. La parte posterior del cuerpo consiste en un abdomen con seis segmentos y un telson. Los primeros cinco segmentos presentan cada uno una espina dorsomedial; el quinto segmento, además, presenta un par de espinas mediolaterales, y el sexto tiene un par de espinas mediolaterales y un par ventrolateral. En la región ventral se pueden observar claramente los primordios de los pereiópodos.
El telson ahora presenta ocho pares de setas caudales y forma parte del sexto segmento abdominal. En la parte final de este segmento se pueden observar un par de urópodos funcionales que presentan exopoditos y endopoditos. El exopodito presenta seis setas terminales y es más largo que el endopodito, el cual tiene dos setas terminales en las puntas.